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2017年25期
大腸桿菌Ⅱ型丙酮酸激酶的表達·純化及鑒定
| 作 者 | 趙龍，周賢軒 |
| 第一作者 | 趙龍 |
| 作者單位 | 合肥工業大學生物與食品工程學院，安徽合肥 |
| 卷 號 | 45 |
| 發表年份 | 2017 |
| 發表刊期 | 25 |
| 發表頁面 | 142-144，174 |
| 關 鍵 字 | Ⅱ 型丙酮酸激酶；蛋白表達；高效液相色譜；大腸桿菌；ATP再生系統, |
| 摘 要 | ［目的］獲得大腸桿菌的 Ⅱ 型丙酮酸激酶。［方法］首先用MEGA7軟件對不同生物丙酮酸激酶的編碼基因進行聚類分析；通過聚合酶鏈式反應(PCR)擴增了大腸桿菌的 Ⅱ 型丙酮酸激酶基因pykA，將其克隆到pET28a載體中，構建了重組質粒載體pET28a-pykA并在大腸桿菌BL21中實現了 Ⅱ 型丙酮酸激酶（PykA）的高效表達；利用鎳柱親和層析系統純化了PykA蛋白，并進行了高效液相色譜（HPLC）檢測。［結果］聚類分析結果表明，大腸桿菌 Ⅱ 型丙酮酸激酶與其他原核生物的丙酮酸激酶氨基酸序列具有高度同源性。HPLC檢測發現Ⅱ型丙酮酸激酶PykA在體外可以高效地將ADP轉化為ATP。［結論］該研究獲得了 Ⅱ 型丙酮酸激酶，為ATP的合成以及 Ⅱ 型丙酮酸激酶為基礎的ATP再生系統的研究提供了參考。 |
| 附 件 |
大腸桿菌Ⅱ型丙酮酸激酶的表達·純化及鑒定
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