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2023年10期
單核細胞增生李斯特菌LAMP檢測方法的建立及應用
| 作 者 | 陳平亞，何翠華，張亮亮，吳少榮，王綏家，趙光遠 |
| 第一作者 | 陳平亞 |
| 作者單位 | 海南醫學院熱帶醫學院，海南海口 |
| 卷 號 | 51 |
| 發表年份 | 2023 |
| 發表刊期 | 10 |
| 發表頁面 | 74-78 |
| 關 鍵 字 | 單增李斯特菌；環介導等溫擴增；actA基因 |
| 摘 要 | ［目的］建立一種單核細胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes)環介導等溫擴增(loopmediated isothermal amplification,LAMP)檢測方法，并對其檢測敏感性、特異性進行評價。［方法］針對單增李斯特菌的actA基因序列，設計6條LAMP特異性引物，通過對LAMP反應體系中的反應溫度、內外引物濃度比、鎂離子濃度等各參數進行優化，確定最優反應體系。以單增李斯特菌株CMCC54006株為陽性對照，其他菌株為陰性對照，驗證LAMP檢測方法的特異性。將純培養的單增李斯特菌菌液提取DNA后10倍梯度稀釋為模板進行LAMP檢測，以測定該檢測方法靈敏度。［結果］建立了特異性檢測單增李斯特菌的LAMP檢測方法，優化后確定了檢測體系中FIP/BIP與F3/B3 的終濃度比為1.6∶0.2，鎂離子濃度為6 mmol/L，dNTPs濃度為1.6 mmol/L，反應溫度為65 ℃。特異性檢測結果顯示，僅單增李斯特菌反應管中的反應液呈綠色，表明建立的檢測方法具有較高特異性。以單增李斯特菌DNA為模板進行的LAMP檢測結果顯示，LAMP檢測方法靈敏度為64 copies/mL。［結論］建立單增李斯特菌的LAMP檢測方法，高效特異，靈敏度高，可直接觀察檢測結果，適合現場檢測。 |
| 附 件 |
單核細胞增生李斯特菌LAMP檢測方法的建立及應用
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