2017年36期

一株石油烴降解菌TY22烷烴羥化酶基因的克隆及功能研究

作  者 唐赟,敬珊,鄒書珍,冀黎駿,楊雪,余小麗
第一作者 唐赟
作者單位 西華師范大學生命科學學院, 四川南充
卷  號 45
發表年份 2017
發表刊期 36
發表頁面 131-134,153
關  鍵  字 石油烴降解菌;烷烴羥化酶;表達;功能,
摘  要 [目的]對一株石油烴降解菌TY22的烷烴羥化酶基因alkB克隆測序,并對其外源表達和功能進行研究。[方法]PCR擴增獲得alkB基因部分序列,再根據該序列通過染色體步移技術,最終獲得完整CDS序列。將alkB基因與pET21b(+)載體構建重組質粒,并轉入E.coli BL21(DE3)進行表達。再將alkB基因克隆至pCom8載體中,分別轉入E.coliGEc137(pGEc47△B)和Pseudomonas fluorescens KOB2Δ1進行基因功能的互補試驗。[結果]染色體步移獲得了1 236 bp的烷烴羥化酶基因完整CDS序列(GenBank Accession: KU867870)。誘導表達發現,重組菌在0.1 mmol/L IPTG、30 ℃條件下誘導培養6 h的表達效果最佳,得到與預期相符的46 kDa蛋白。基因功能互補試驗發現,重組菌能在以C12~C16為唯一碳源的培養基中生長。[結論]TY22菌株的烷烴羥化酶基因完整CDS序列全長1 236 bp,能氧化C12~C16的中長鏈烷烴,并能在大腸桿菌中有效表達。
附  件 一株石油烴降解菌TY22烷烴羥化酶基因的克隆及功能研究
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