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2014年15期
臺蘭ISSRPCR反應體系的建立與優化
| 作 者 | 王朝雯，王云艷，肖春宏，孫小琴， 楊柏云 |
| 第一作者 | 王朝雯 |
| 作者單位 | 臨滄師范高等專科學校數理系，云南臨滄 |
| 卷 號 | 42 |
| 發表年份 | 2014 |
| 發表刊期 | 15 |
| 發表頁面 | 4583-4586，4590 |
| 關 鍵 字 | 臺蘭（Cymbidium floribundum var.pumilum）；ISSR分子標記；ISSRPCR反應體系 |
| 摘 要 |
［目的］建立臺蘭穩定可靠的ISSRPCR分子標記反應體系。［方法］用改良的CTAB法提取葉片的基因組DNA，并對影響臺蘭ISSRPCR反應體系的主要成分進行篩選和優化。［結果］臺蘭的ISSRPCR優化反應體系為：25 μl PCR反應體積中，2.5 μl 10×PCR buffer，2.0 mmol/L MgCl2，100 ng模板DNA，0.5 mmol/L dNTPs，0.22 U Taq DNA 聚合酶，0.4 μmol/L 引物，15.78 μl雙蒸水。最佳擴增程序為：94 ℃預變性5 min，然后進行40個循環：94 ℃變性30 s，復性溫度根據各引物的TM值略低1~2 ℃，30 s，72 ℃延伸50 s，循環結束后72 ℃延伸7 min。［結論］ 臺蘭ISSRPCR優化反應體系為今后利用ISSR技術進行臺蘭種質資源的遺傳多樣性分析奠定了技術基礎。 |
| 附 件 |
臺蘭ISSRPCR反應體系的建立與優化
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