,歡迎光臨bet网站官网雜志社官方網站！
稿件查詢：
2014年03期
人泛素結合酶UbcH5c活性突變體的構建·純化以及催化活性研究
| 作 者 | 張西軒，李 曄，阮海華 |
| 第一作者 | 張西軒 |
| 作者單位 | 天津市食品生物技術重點實驗室，天津 |
| 卷 號 | 42 |
| 發表年份 | 2014 |
| 發表刊期 | 3 |
| 發表頁面 | 663-666 |
| 關 鍵 字 | UbcH5c；泛素化修飾；點突變 |
| 摘 要 |
［目的］構建人泛素結合酶UbcH5c的活性位點突變體S22R和F62A，同時分析這2種突變體蛋白與野生型蛋白在泛素化反應中的活性差異。［方法］通過點突變（Site-Directed Mutagenesis）的方法構建2種突變體質粒，利用0.5 mmol/L IPTG分別誘導2種突變體蛋白在大腸桿菌中進行表達；將菌體超聲破碎后，依次利用陽離子交換層析法對UbcH5c突變蛋白進行分離純化，最后利用體外泛素化酶促反應結合蛋白免疫印跡雜交的方法分析野生型UbcH5c與其活性突變體UbcH5c S22R和UbcH5c F62A在泛素化修飾上的差異。［結果］人泛素結合酶UbcH5c的2個突變體蛋白S22R、F62A的泛素化修飾程度明顯弱于野生型蛋白。［結論］突變體S22R和F62A突變均不同程度的改變了人泛素結合酶UbcH5c與泛素分子之間的結合活性，即2個突變的位點中第62位苯丙氨酸殘基及第22位絲氨酸殘基均是UbcH5c結合泛素的關鍵位點，而且后者對于UbcH5c結合泛素活性的影響更大。 |
| 附 件 |
人泛素結合酶UbcH5c活性突變體的構建·純化以及催化活性研究
|
| 注：若需下載，請右鍵單擊另存 |
