2023年09期

利用CRISPR/Cas9基因編輯技術創建水稻OsPUX2突變體

作  者 高上,滿淼淼,趙華,張麗娜,王加峰
第一作者 高上
作者單位 華南農業大學國家植物航天育種工程技術研究中心,廣東廣州
卷  號 51
發表年份 2023
發表刊期 9
發表頁面 73-76
關  鍵  字 水稻;U-box;OsPUX2;CRISPR/Cas9;基因編輯
摘  要 [目的]U-box蛋白是一類決定靶標蛋白特異性的E3泛素連接酶(少部分屬于泛素鏈聚集因子-E4),在植物抗病、抗逆和生長發育各階段都發揮著重要作用。為揭示U-box蛋白家族基因OsPUX2在水稻防御反應中的具體生物學功能,利用CRISPR/Cas9編輯技術對OsPUX2基因進行編輯。[方法]在OsPUX2第1外顯子設計1個20 bp的編輯靶點,構建了OsPUX2基因敲除載體pRGEB32-OsPUX2-gRNA載體,并通過農桿菌介導的轉化方法侵染水稻Pik-H4 NIL愈傷組織,經潮霉素檢測獲得轉基因陽性植株,并對T0代轉基因植株進行靶點區域序列進行PCR和測序分析,分析ospux2的突變類型。[結果]成功獲得了ospux2的敲除突變體材料,對突變類型的分析發現,轉基因編輯后代共存在7種突變類型,以缺失突變為主,其中一種純合突變類型在OsPUX2第一個外顯子的第115號堿基處缺失了一個C堿基,導致蛋白的翻譯在第84個氨基酸處提前終止。[結論]該研究獲得ospux2突變株系對進一步研究該基因的功能具有重要意義。
附  件 利用CRISPR/Cas9基因編輯技術創建水稻OsPUX2突變體
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