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2019年19期
擬南芥Ib bHLH家族基因CRISPR/Cas9敲除載體的構建
| 作 者 | 樊玲玲，馬銘悅，韓 毅 |
| 第一作者 | 樊玲玲 |
| 作者單位 | 合肥工業大學食品與生物工程學院，安徽合肥 |
| 卷 號 | 47 |
| 發表年份 | 2019 |
| 發表刊期 | 19 |
| 發表頁面 | 118-120，151 |
| 關 鍵 字 | 擬南芥；Ib BHLH家族基因；載體構建；CRISPR/Cas9 |
| 摘 要 | ［目的］全氟辛酸（PFOA）處理能顯著誘導擬南芥Ib bHLH（Ib basic helixloophelix）家族4個轉錄因子bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的轉錄水平。為了進一步分析這4個基因在響應PFOA中的潛在作用，利用CRISPR/Cas9技術構建了它們的共敲除載體。［方法］以野生型擬南芥基因中的外顯子為模板，設計引物，通過兩步PCR擴增法將靶向基因連接到CRISPR/Cas9載體上；將構建成功的重組質粒轉化到大腸桿菌DH5α感受態細胞中，挑取陽性菌落，PCR鑒定正確后，將其質粒轉入農桿菌GV3101感受態細胞中，再次挑取陽性菌落進行PCR鑒定正確后，提取質粒進行表達盒測序。［結果］通過兩步PCR擴增法，成功將4個靶點表達盒轉入到CRISPR/Cas9載體中，構建了bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的雙元CRISPR/Cas9敲除載體。［結論］成功構建的Ib BHLH家族CRISPR/Cas9敲除載體，為后續擬南芥Ib BHLH家族四突突變體材料的獲得提供了可用性載體。 |
| 附 件 |
擬南芥Ib bHLH家族基因CRISPR/Cas9敲除載體的構建
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